革蘭氏陰/陽菌
革蘭氏染色是用來鑒別細菌的一種方法,細菌細胞壁上的主要成份不同,利用這種染色法,可將細菌分成兩大類,即革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌。這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(Hans Christian Gram,1853年-1938年)於1884年所發明,最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
1. 革蘭氏染色的對象是細菌的細胞壁。染色後的細菌可在顯微鏡下更好的觀察,以便於區分。
2. 不同的細菌在該染色法的作用底下反應不同,藉以區分成為兩類:
革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌對抗生素的反應並不一樣。通過抽取樣品醫生可以在很短的時間內(5分鐘左右)確定細菌的革蘭氏性質。這樣,醫生就可以迅速的給病人注射抗生素,而不需要等待通過細菌培植得到的化驗結果,這往往需要幾天時間。
染色流程及原理
流程可概括為:染色-脫色-復染。
定性
KOH-試驗
另外的一種方法是氫氧化鉀-試驗。將培養好的細菌取出一小部分,使其懸浮於一滴KOH溶液中。革蘭氏陽性菌與之不發生反應,用細針穿過該溶液,溶液呈正常液體狀。革蘭氏陰性菌因細胞壁中主要成分為脂多醣,脂質含量較高,接觸強鹼KOH後與KOH發生皂化反應,以細針穿過會有明顯黏稠狀。
氨肽酶試驗
除了個別例外,只有革蘭氏陰性菌才能證明氨肽酶的存在。這是該試驗的基礎。 將要進行試驗的細菌放入試管加水。放入一張顯示肽酶活性的試紙,在37°C下等待10到35分鐘,試紙變成深黃色。
實驗方法
藥品
實驗器材
實驗菌種、接種環、蒸餾水、玻片、酒精燈、吸水紙、顯微鏡
實驗步驟
注意事項:
實驗結果
1. 革蘭氏染色的對象是細菌的細胞壁。染色後的細菌可在顯微鏡下更好的觀察,以便於區分。
2. 不同的細菌在該染色法的作用底下反應不同,藉以區分成為兩類:
- 革蘭氏陽性細菌,胞壁染色後呈藍紫色
- 革蘭氏陰性細菌,染色後呈紅色。
革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌對抗生素的反應並不一樣。通過抽取樣品醫生可以在很短的時間內(5分鐘左右)確定細菌的革蘭氏性質。這樣,醫生就可以迅速的給病人注射抗生素,而不需要等待通過細菌培植得到的化驗結果,這往往需要幾天時間。
染色流程及原理
流程可概括為:染色-脫色-復染。
- 第一步初染劑(Primary Stain):使用結晶紫染色。
- 第二步媒染劑(Mordant)
- 第三步脫色劑(Decoloring Agent)
- 第四步複染劑(Counterstain)
定性
KOH-試驗
另外的一種方法是氫氧化鉀-試驗。將培養好的細菌取出一小部分,使其懸浮於一滴KOH溶液中。革蘭氏陽性菌與之不發生反應,用細針穿過該溶液,溶液呈正常液體狀。革蘭氏陰性菌因細胞壁中主要成分為脂多醣,脂質含量較高,接觸強鹼KOH後與KOH發生皂化反應,以細針穿過會有明顯黏稠狀。
氨肽酶試驗
除了個別例外,只有革蘭氏陰性菌才能證明氨肽酶的存在。這是該試驗的基礎。 將要進行試驗的細菌放入試管加水。放入一張顯示肽酶活性的試紙,在37°C下等待10到35分鐘,試紙變成深黃色。
實驗方法
藥品
- 結晶紫:作為初染劑
- 碘液:作為媒染劑
- 酒精:濃度為95%,作為脫色劑
- 番紅:複染劑
實驗器材
實驗菌種、接種環、蒸餾水、玻片、酒精燈、吸水紙、顯微鏡
實驗步驟
- 將菌種抹於玻片上,並置於酒精燈上加以熱固定。
- 將結晶紫滴於玻片上,靜置一分鐘後用蒸餾水洗去多餘的結晶紫。
- 將碘液滴於玻片上,靜置一分鐘後,用蒸餾水洗去多餘的碘液。
- 酒精脫色,直至無結晶紫的顏色流出為止。
- 以番紅複染,約45秒後用蒸餾水洗去。
- 用吸水紙將多餘的水吸乾後,即可置於顯微鏡下觀察。
注意事項:
- 以酒精燈烘乾玻片時,應避免熱源持續對同一點加熱,以免玻片破掉。
- 以蒸餾水洗去多餘藥品時,應避免直接沖洗到樣品的位置,可將玻片與水平面呈一個角度,使蒸餾水由玻片較高處往樣品處流去。
- 此實驗的標準作法應於無菌的狀態下操作。
- 本實驗可以大腸桿菌和金黃葡萄球菌作為控制組。
實驗結果
- 革蘭氏陽性菌呈現紫色,或更深的藍黑色。
- 革蘭氏陰性菌呈現粉紅色或紅色。
補充
革蘭氏陽性菌(英文:Gram Positive)是能夠用革蘭氏染色染成深藍或紫色的細菌,而革蘭氏陰性菌不能被染色(但会涂成红色以对比)。它們細胞壁中含有較大量的肽聚糖,但經常缺乏革蘭氏陰性菌所擁有的第二層膜和脂多糖層。
革蘭氏陰性菌細胞壁中肽聚糖含量低,而脂類含量高。當用乙醇處理時,脂類物質溶解,細胞壁通透性增強,使結晶紫極易被乙醇抽出而脫色;再度染上復染液番紅的時候,便呈現紅色了。
革蘭氏陽性菌(英文:Gram Positive)是能夠用革蘭氏染色染成深藍或紫色的細菌,而革蘭氏陰性菌不能被染色(但会涂成红色以对比)。它們細胞壁中含有較大量的肽聚糖,但經常缺乏革蘭氏陰性菌所擁有的第二層膜和脂多糖層。
革蘭氏陰性菌細胞壁中肽聚糖含量低,而脂類含量高。當用乙醇處理時,脂類物質溶解,細胞壁通透性增強,使結晶紫極易被乙醇抽出而脫色;再度染上復染液番紅的時候,便呈現紅色了。